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人類 及小鼠 Safe Harbor ORF 敲入克隆

Safe Harbor ORF敲入克隆能通過TALEN或CRISPR介導的同源重組(HR),將客戶感興趣的基因ORF從供體克隆整合到人類或小鼠基因組的safe harbor位點。該供體克隆可搭配Safe Harbor 基因敲入試劑盒使用。試劑盒中的TALEN或CRISPR克隆能靶向剪切人類AAVS1或小鼠ROSA26 safe harbor位點,生成DNA雙鏈斷裂(DSB),在該位點誘發同源重組(HR)修複機製(圖1)。目前這一係列敲入克隆有超過20,000條序列確證的人類OFR和超過20,000條序列確證的小鼠ORF可供選擇。

 

 

圖1: 基因組編輯工具介導的 safe harbor 基因敲入原理圖

 

(A)
(B)

圖2. (A)人類 AAVS1 Safe Harbor ORF 敲入克隆;(B)小鼠ROSA26 Safe Harbor ORF 敲入克隆。

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未命名

圖6:以SOX2及OCT4為敲入基因的人類基因組AAVS1 safe harbor位點基因敲入實驗。

(A)在六孔板上將OCT4(Cat#: DC-Z0092-SH01) 或SOX2(Cat#: DC-T2547-SH01) 供體質粒與AAVS1 TALEN組合共轉染到HEK293T細胞。轉染48小時後細胞傳代,以嘌呤黴素(1µg/ml)篩選2周。轉染48小時或篩選2周後用顯微鏡(Nikon Eclipse Ti ) 檢查CopGFP的表達情況。隻用供體質粒轉染的對照組在嘌呤黴素篩選後隻有少量細胞存活(數據未展示)。

(B)對AAVS1位點穩定整合SOX2(Cat#: DC-T2547-SH01) 或 OCT4 (Cat#: DC-Z0092-SH01) 的HEK293T細胞進行分析。同個印跡實驗中,陰性對照(未經轉染的HEK293T細胞)的內源SOX2或OCT4蛋白水平低至無法檢出。

 

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SH300 人類 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克隆(DC-C9NU-03 ORF區為 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 AAVS1 safe harbor 位點。 (Puromycin) ¥4000
SH301 人類 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克隆(DC-C9NU-04 ORF區為 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 AAVS1 safe harbor 位點。 (Hygromycin) ¥4000
SH302 人類 AAVS1 safe harbor Cas9 敲入克隆(DC-C9NU-05 ORF區為 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 AAVS1 safe harbor 位點。 (Neomycin) ¥4000
SH350 小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克隆(DC-C9NU-06 ORF區為 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 小鼠 ROSA26 位點。(Puromycin) ¥4000
SH351 小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克隆(DC-C9NU-07 ORF區為 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 小鼠 ROSA26 位點。 (Hygromycin) ¥4000
SH352 小鼠 ROSA26 safe harbor Cas9 敲入克隆(DC-C9NU-08 ORF區為 Cas9 核酸酶基因,由 CBh 啟動子啟動表達。能將Cas9 核酸酶基因整合到人類 小鼠 ROSA26 位點。 (Neomycin) ¥4000
  多種 人類 AAVS1 或小鼠 ROSA26 ORF 敲入克隆 由 CMV 啟動子啟動 ORF 表達。能將 ORF 或您的目的基因敲入人類 AAVS1 或小鼠 ROSA26 safe harbor 位點。

 

 

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