miRNA 3′ UTR 克隆

產品介紹

GeneCopoeia提供哺乳動物表達載體的人、小鼠、大鼠miRNA 3' UTR克隆,可用於miRNA靶標驗證、預測靶標的功能確證和miRNA對靶標的調控作用的研究。

 

本公司提供兩套3'UTR報告載體。在pEZX-MT05載體中,我們將3'UTR序列(來源於公開的基因序列數據庫)插入到Gaussia熒光素酶報告基因下遊,在哺乳動物細胞中由SV40啟動子驅動轉錄生成Gaussia熒光素酶(Gluc)和3'UTR靶標序列的嵌合mRNA,因此無需裂解細胞實時監測Gluc的表達,研究mRNA-miRNA的相互作用。在相同載體(pEZX-MT05)上帶有分泌型堿性磷酸酶(SEAP)報告基因。CMV啟動子驅動轉錄的SEAP作為同質粒內的對照,這種雙報告係統可以對多樣本常規轉染進行精確比較。

pEZX-MT06是Firefly/Renilla雙熒光素酶報告載體。3'UTR序列在Firefly(hLuc)熒光素酶報告基因下遊,CMV啟動子驅動轉錄的Renilla(hRLuc)作為同質粒內的對照。通過裂解細胞檢測hLuc和hRLuc的表達。

mirna target with luciferase reporter

 
            圖1. miRNA 3' UTR克隆載體骨架

 

 

圖2. 靶標序列(3' UTR)表達克隆中miRNA的抑製作用

已知LIN28基因是miR-125a的靶標。HEK 293細胞轉染Lin28 miRNA靶標序列表達克隆(左)或者共轉染miR-125a前體miRNA表達克隆(右)。轉染24小時後檢測GLuc 和內參SEAP活性。僅轉染Lin28 miRNA靶標序列表達克隆的細胞中Gluc和SEAP活性之比定為1(左),以此確定共轉樣本中的比值。如圖所示,miR-125a抑製了GLuc-LIN28-3'-UTR克隆中Gluc 70%以上的活性。

 

優勢

 

可進行活細胞分析

  • 分泌型GLuc報告基因
  • 無需裂解細胞
  • 節省時間和樣本,減少突變,簡化試驗流程

雙報告載體係統

  • 可以對多樣本常規轉染進行精確比較

高通量兼容

  • 多個樣本可同時分析

高靈敏度

  • GLuc比螢火蟲或Renilla熒光素酶靈敏度高1000倍

使用方便

  • 所有靶標(3' UTR)克隆均可用於即時轉染

載體與配套試劑盒

3' UTR 克隆載體及配套試劑盒

載體 報告基因 示蹤基因 優勢與特點 配套的分析試劑盒
pEZX-MT05 Gaussia luciferase Secreted alkaline phosphatase (SEAP) 適用於活細胞分析 Secrete Pair ™ Dual Luminiscence Assay Kit
pEZX-MT06 Firefly luciferase Renilla luciferase 需要裂解細胞 Luc-Pair™ Duo-Luciferase Assay Kitt

 
注意:
miRNA靶標驗證使用GeneCopoeia提供的pEZX-MT05和pEZX-MT06靶標克隆,我們推薦使用Secrete-Pair™ Dual Luminescence Assay Kit和Luc-Pair™ miR Luciferase Assay Kit。點擊這裏獲取更多克隆驗證的信息。

訂購

預製的3' UTR表達克隆

GeneCopoeia提供超過18,000種人、18,000種小鼠和10,000種大鼠不同載體的預製3’UTR表達克隆。

 

客戶定製服務

需要定製3' UTR克隆? 請填寫這裏或發郵件到support@igenebio.com.

 

下載
 MiTarget™ MicroRNA 3' UTR Clone Cancellation, QA, License, and Warranty

 

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