您的位置: 首頁 > 技術 >

AviTag™ 技術— 用於蛋白純化、固定、檢測的生物素化標記

產品介紹

AviTag™是常用的融合標簽因為其多樣的應用,滿足科研的多種需求。 

  • 表達
  • 顯影
  • 檢測
  • 定位
  • 純化
  • 固定

 

技術介紹

AviTag™標簽蛋白可以被體內或體外的生物素連接酶生物素酰化,抗生物素蛋白或鏈黴親和素可以專一地與生物素結合,因而可用於蛋白的固定,純化和顯影。點擊看 AviTag技術的應用

可與OmicsLink™即用型表達克隆配套使用

GeneCopoeia提供帶有 AviTag™ 標簽的多種載體,部分載體上帶有 IRES (Internal Ribosome Entry Site)或SUMO, 6xHIS等元件。點擊查看帶有AviTag所有表達克隆載體。

帶有AviTag的載體由T7或CMV啟動子驅動轉錄,可以應用於 20,000多種人和15,000種小鼠基因。

 

特異性

帶有AviTag的重組蛋白的生物素酰化具有高度特異性。當反應體係中存在生物素和ATP時,生物素連接酶可催化形成酰胺鍵,鏈接生物素與15-aa 肽鏈的特定賴氨酸基團。

生物素酰化的蛋白在天然條件下極難發生交叉反應,尤其比抗體發生交叉反應的概率要低得多。

GeneCopoeia也提供生物素連接酶,生物素化的菌株和帶有 Avitag的載體

點擊了解生物素連接酶

 

與化學生物素標記相比的優勢

  • 化學生物素標記可能會因為隨機的生物素化將生物素連接到蛋白催化或者結合的區域,導致蛋白失活。 使用Avi-Tag可以在體內體外簡單有效地生物素化特異的AviTag位點。
  • 使用Avi-Tag進行生物素酰化可以在溫和的條件下進行高效特異地標記。
  • 化學生物素標簽是85個氨基酸,而生物素AviTag標簽隻有15個氨基酸,可以盡量降低標簽對蛋白的空間結構的影響。
AviTag ORF cDNA clones

 

 

 

AviTag ORF cDNA clones

Figure1. OmicsLink ORF cDNA expression clones with N- and C-terminus AviTag in various mammalian vector systems.

 

How it works

AviTag ORF clone to biotinylated protein

載體信息

帶有Avitag表達載體列表

載體 啟動子 宿主細胞 篩選標記 標簽 蛋白酶位點
pReceiver-B09 T7 E. Coli N/A N-Avi N/A
pReceiver-Lv108 CMV Stem/primary/others* Puromycin N-Avi N/A
pReceiver-Lv124 CMV Stem/primary/others* Puromycin C-Avi N/A
pReceiver-Lv242 CMV Stem/primary/others* Puromycin C-Avi-FLAG N/A
pReceiver-M05 CMV Mammalian Neomycin N-Avi N/A
pReceiver-M17 CMV Mammalian Neomycin C-Avi N/A
pReceiver-M48 CMV Mammalian Neomycin N-Avi+IRES-Biotin ligase N/A
pReceiver-WG04 T7 cell free N/A N-AviSUMO SUMO Protease
pReceiver-WG05 T7 cell free N/A N-HisAviSUMO SUMO Protease
pReceiver-WG31 T7 cell free N/A N-HisSUMOAvi SUMO Protease

 

點擊了解即用型ORF克隆,提供大腸杆菌、哺乳動物細胞、昆蟲細胞、酵母和麥胚無細胞表達克隆載體。

查看 AviTag™相試劑

AviTag™是Avidity的商標,AviTag™技術(美國專利號5,723,584、5,874,239和5,932,433)由科羅拉多州丹佛的Avidity有限公司所有。

 

 

 

應用實例

   帶AviTag的cDNA克隆及融合蛋白的應用

  • 固定化的AviTag標簽融合蛋白的應用於高通量篩選、表麵等離子體共振檢測蛋白間相互作用等方麵。
  • 利用單體抗生物素來進行AviTag融合蛋白純化。
  • 與抗生物素或鏈黴親和素結合之後,AviTag標簽融合蛋白可以使用多種方法檢測,如Western Blots和MHC四聚體(染色和分選T細胞)

 

嚴格的質檢和質量保證

OmicsLink clone collection裏的所有ORF表達克隆源於驗證過的全長cDNA克隆或高質量的人源cDNA組織文庫。

寄送之前,GeneCopoeia對所有的克隆進行了嚴格的質檢過程。

  • 所有的ORF經過全長測序
  • 通過PCR驗證序列長度
  • 通過酶切驗證質粒的正確性

 

體外生物素酰化AviTag重組蛋白示例

Biotinylated proteins visualized on a western blot with streptavidin-HRP conjugate and chemiluminescent substrate
 

Figure2. 轉染帶有AviTag和eGFP的載體或AviTag- IkBα表達克隆到293T細胞,以未轉染的細胞為對照,所有細胞均加入純化的生物素連接酶、生物素(50M) 、ATP(10mM)。 的提取物的混合純化的生物素連接酶,生物素( 50M )和ATP ( 10mM的)如該圖所示。混合物在30℃孵育30分鍾 ( 1-7、 9-13泳道 )或4℃孵育30分鍾(8、14泳道)後SDS-PAGE結果如圖所示。生物素化的蛋白通過和鏈黴親和素-HRP、化學發光底物(Pierce)結合,可以使用western blot顯影。

 

體內生物酰素化AviTag重組蛋白示例

Biotinylated proteins visualized on a western blot with streptavidin-HRP conjugate and chemiluminescent substrate
 

Figure3.僅轉染帶有AviTag和eGFP的載體或AviTag- IkBα表達克隆到293T細胞,或共轉染生物素連接酶。13小時後提取產物使用 12% SDS-PAGE凝膠進行電泳。生物素化的蛋白通過和鏈黴親和素-HRP、化學發光底物(Pierce)結合,可以使用western blot顯影。

 

Example of precipitation of biotinylated AviTag recombinant proteins with streptavidin beads

Biotinylated proteins visualized on a western blot with streptavidin-HRP conjugate and chemiluminescent substrate
 

Figure4. 293T cells were transfected with different combinations of AviTag expression plasmids and biotin ligase, as indicated in the figure. Lysates were prepared 24 hours after transfection and incubated with streptavidin beads for 8 hours. Suspensions were centrifuged and pelleted beads were washed 3 times. Cell lysates (L), supernatants (S) and pelleted biotinylated protein bound to streptavidin beads (B) were resolved by SDS-PAGE. Biotinylated proteins were visualized on a western blot with streptavidin-HRP conjugate and chemiluminescent substrate (Pierce).